国药中生武招字第（2017）057号
招标内容：76696vic维多利亚老品牌脊髓灰质炎（sabin株）单克隆抗体制备服务
1.目的
课题《sIPV的II型病毒抗原定量检测试剂盒研制》需要订制一株能够区分识别sIPV的I型、II型、III型病毒的C抗原和D抗原的单克隆抗体（最好抗体具有中和活性）.
2.范围
仅用于76696vic维多利亚老品牌sIPV的II型病毒D抗原单克隆抗体订制服务。
3.内容
3.1合格的投标人必须具备以下条件：
3.1.1、符合《中华人民共和国政府采购法》第二十二条规定的供应商。
3.2、具有病毒类疫苗单抗制作经验
3.2.1公司单抗制备需有5年以上单抗制备经验
3.2.2项目负责人需具备5年以上抗体药物研发管理经历
3.2.3 抗体药物研发团队不少于30人
3.2.4 具有抗体高通量自动化筛选平台
4、其他资质要求：
4.1本次招标不接受联合投标。
4.2本项目面向大、中、小等各类供应商采购，但不接受转包公司提供的服务。
4.3具有合法经营资质和认证认可资质。
4.4近3年无缴纳税收和社会保障资金的不良记录，有良好的商业信誉和较强的经济能力。
4.5具有完善的质量管理体系及突发事件应急预案。
5、项目概况：
5.1、项目名称：武汉生物制品研究所脊髓灰质炎病毒（sabin株II型病毒）单克隆抗体制备服务
5.2、招标类型：脊髓灰质炎单抗定制合同，长期有效
5.3、项目主要流程、要求：
5.3.1服务流程：
|
阶段 |
内容 |
|
１．免疫程序(大约75天左右) |
Ｔ－１：预取血５-８只Balb/c纯系小鼠。
Ｔ＋０：初免，10-100ug（完全佐剂），皮下多点注射。
Ｔ＋21：加强１，10-100ug（非完全佐剂），皮下多点注射。
Ｔ＋42：加强２，10-100ug（非完全佐剂），皮下多点注射。
Ｔ＋52：试取血，ELISA检测滴度取滴度较高的小鼠。
Ｔ＋72：终加强，10-100ug（非完全佐剂），尾静脉注射。 |
|
２．融合： |
免疫75天后（终免疫３天后）的鼠脾细胞和SP2/0骨髓瘤细胞融合。 |
|
３．筛选阳性细胞克隆：(大约10-20天) |
融合后10-20天，经2-3次筛选，包括自身抗原的阳性筛选和交叉抗原的阴性筛选。 |
|
４．克隆化及检测：(大约10-20天) |
筛选后，两次亚克隆，同时进行检测。 |
|
５．腹水方式制备单克隆抗体：(10-20天) |
选取多株，分别免疫两只BALB/c小鼠提取2ml以上腹水。 |
|
６．抗体纯化：(大约7天) |
腹水经辛酸和硫酸铵两步纯化。 |
|
说明: |
1: 免疫5－8只 Balb/c纯系小鼠。
2:选取高滴度免疫小鼠取脾细胞与骨髓瘤细胞融合。
3: 提供尽可能多的细胞克隆，并保证至少有3株是针对目的抗原的细胞株，但不能保证你们用该株细胞的抗体的后续开发的结果。
4: 提供多株（至少3株）单克隆细胞上清≥1ml/株，腹水≥2 ml/株。
5: 腹水纯化后抗体ELISA效价≥1：20，000。
6:客户提供抗原,抗原纯度90%以上。
7: 所有的细胞株（包括特异及非特异的细胞株） 及抗体的知识产权归武汉生物制片研究所所有。
9:所有研究过程中产生的细胞株、抗体及文件要交付76696vic维多利亚老品牌。
10; 其他事宜,双方进行协商。 |
5.3.2具体杂交瘤细胞的筛选，亚克隆及鉴定的要求：
5.3.2.1杂交瘤细胞的筛选和亚克隆的要求
加 HAT 培养基于 96 孔板培养 。融合后细胞长满 1 3 ～ 2 3 孔时 ,取培养上清采用间接ELISA 法，间接免疫荧光法 2 种方法对杂交瘤细胞进行筛选（直接用 Elisa（铺4块板子）先区分D和C ，再用间接免疫荧光法筛选），检测其与 D 、C 抗原的反应性,选取与 D 抗原反应而与 C 抗原不反应的阳性孔杂交瘤细胞孔，并采用有限稀释法对细胞进行 3 次亚克隆。
进一步以 Balb c 小鼠腹腔巨噬细胞为饲养细胞进行亚克隆。经过至少 3 次有限稀释获得均一阳性克隆。将克隆纯化的杂交瘤细胞扩大培养,调整细胞数 1 ×106 ～ 2 ×106/ mL, 取 1 mL 细胞悬液注入经液体石蜡预处理 2 周的 Balb/c 小鼠腹腔内,收集腹水, -20 ℃保存。
5.3.2.2鉴定的要求
5.3.2.2.1腹水的鉴定
腹水抗体效价检测 ELISA 测得抗体效价，中和抗体效价，抗体亚型和蛋白总质量浓度。
腹水特异性鉴定 腹水抗体与Ⅱ型Sabin 株C 抗原和 Ⅰ 、Ⅲ型 Sabin 株病毒 C、D 抗原不发生交叉反应
5.3.2.2.2抗体的鉴定
间接 ELISA 法和微量中和实验检测抗体效价；用Ⅰ型、Ⅱ型 、Ⅲ型 Sabin 株抗体包被 , 加 Sabin IPV 抗原(Ⅰ 、Ⅱ、Ⅲ型 D 抗原 ,Ⅱ型C 抗原),进行 ELISA 检测抗原抗体反应性; 秋水仙素阻抑法分析杂交瘤细胞染色体; ELISA检测抗体亚型; BCA 法测量蛋白含量。
5.3.3 最终得到单抗的要求
最后得到单克隆抗体 ,只与脊灰病毒Ⅱ型 Sabin 株 D 抗原发生反应, 与脊灰病毒 Ⅱ型Sabin 株 C 抗原 , Ⅰ型 Sabin 株 D 抗原和C抗原 , Ⅲ型 Pfizer 株D 抗原和C抗原无交叉反应
5.4.融合后的筛选，76696vic维多利亚老品牌可以派人员参与。
5.5.交付日期
项目签订后4个月内完成交付达到要求的单克隆抗体。
5.6．单克隆抗体细胞株及抗体知识产权属于76696vic维多利亚老品牌
6.1报名截止日期：2017年06月09 日下午3:30时
6.2报名资质：投标人持公司营业执照（副本）、行业许可证、法人委托书、代理人身份证前来报名。
6.3此项目评标标准是以低价优先原则做为商务部分评选基础，通过评委综合评选后确定中标推荐人。
6.4投标书需准备3份，一正二副，所有投标方制作标书中必须加入反商业贿赂承诺书。否则视为无效标书。
反商业贿赂承诺书.doc
7.发布人名称：76696vic维多利亚老品牌
7.1联系地址：武汉市江夏区黄金工业园路一号
7.2联系人：吴德鑫 汪 洋
联系电话：027-86637028
报名邮箱：wangyang16@sinopharm.com